Assays zur Abtötung durch Immunzellen

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Arbeitsablauf

Hämatologische Tumoren

Literatur

Erfassen Sie die Abtötung durch Immunzellen in Echtzeit

xCELLigence RTCA nutzt eine markierungsfreie, impedanzbasierte Technologie, um die Abtötung durch Immunzellen kontinuierlich und automatisch zu messen – über Minuten bis Tage. So lässt sich der Verlauf in Echtzeit bei niedrigen, physiologisch relevanten Effektor:Zielzell-Verhältnissen (E:T) verfolgen, was hochsensitive, quantitative Wirksamkeitsdaten liefert.

Präzise Messungen in Echtzeitder Wirksamkeit der Abtötung durch Immunzellen.

Detaillierte Einblicke in Abtötungsmechanismen, serielle Abtötung und Erschöpfung (Exhaustion).

Einfache Arbeitsabläufe – Zellen aussäen und die Abtötungskinetik unter physiologischen Bedingungen verfolgen.

FDA 21 CFR Part 11 konform – für die Integrität elektronischer Daten.

die Abtötung durch Immunzellen Assay-Arbeitsablauf

xCELLigence RTCA misst die Abtötung durch Immunzellen mit impedanzbasierter Technologie kontinuierlich und automatisch über Minuten bis Tage – ohne zusätzliche Markierung. Dieser anwenderfreundliche Arbeitsablauf mit hohem Durchsatz ermöglicht eine präzise Verfolgung bei niedrigen, physiologisch relevanten Effektor:Zielzell-Verhältnissen (E:T) und liefert sensitive, quantitative Wirksamkeitsdaten.

Einfach in der Anwendung: Geben Sie Ziel- und Effektorzellen in die patentierten E-Plates, setzen Sie die E-Plate in das xCELLigence-Gerät ein und starten Sie die Messung:

Assay-Prinzip: Adhärente Zielzellen wachsen auf den Goldsensoren, der Cell Index steigt; nicht-adhärente Effektorzellen allein erzeugen kein Signal; nach ihrer Zugabe fällt der Cell Index, umso steiler je höher das Effektor-zu-Zielzell-Verhältnis

Schritt 1: Adhärente Zielzellen (z. B. Tumorzellen) werden in die Wells der E-Plate ausgesät. Der Cell Index steigt, während die Zielzellen anhaften und proliferieren.

Schritt 2: Nicht-adhärente Effektorzellen (z. B. CAR-T-Zellen) werden in die Wells gegeben. Diese Zellen führen zu keinem Anstieg des Cell Index, da sie nicht an den Goldelektroden anhaften.

Schritt 3: Die zytolytische Aktivität der Effektorzellen wird empfindlich und präzise erfasst und zeigt sich als Abfall des Cell Index.

Application Note:Real-Time, Label-Free Measurement of Natural Killer Cell Activity and Antibody-Dependent Cell-Mediated Cytotoxicity

Mehrere Perspektiven auf die Abtötungsaktivität von Immunzellen

Forschende optimieren chimäre Antigenrezeptor-T-Zellen kontinuierlich, um Spezifität, Wirksamkeit und Persistenz zu maximieren. Das xCELLigence RTCA eSight kombiniert impedanzbasierte Technologie mit Live-Cell-Imaging und liefert so hochsensitive, multiplexe und quantitative Messungen der Abtötung durch Immunzellen aus mehreren Perspektiven – ohne zusätzlichen Arbeitsaufwand. Sie erhalten konsistentere Ergebnisse und sparen Zeit, indem Sie die Abtötung durch Immunzellen in einem einzigen Arbeitsablauf messen.

Impedanzbasierte Daten mit Live-Cell-Imaging multiplexen – für höhere Ergebnissicherheit

Während die Standardsysteme xCELLigence RTCA (Modelle SP, MP und HT) umfassende, nicht-invasive und markierungsfreie Messungen im 96- oder 384-Well-Format bieten, kombiniert das xCELLigence RTCA eSight diese Technologie zusätzlich mit Live-Cell-Imaging und stärkt damit die Verlässlichkeit Ihrer Zellanalysen und Ergebnisse weiter. Mit diesem integrierten Gerät erfassen Sie fünf komplementäre Datenströme – Impedanz, Hellfeld sowie rote, grüne und blaue Fluoreszenzbildgebung – an ein und derselben Zellpopulation und gewinnen so tiefere Einblicke in die Immunzell-vermittelte Abtötung.

Application Note:Real-Time Potency Assay for CAR T Cell Killing of Adherent cancer cells

impedanzbasierte Technologie

Assays zur Abtötung durch Immunzellen bei hämatologischen Tumoren

Der Assay zur Immunzell-vermittelten Abtötung mit xCELLigence RTCA lässt sich auch auf Zellen hämatologischer Tumoren übertragen: Dazu werden die Wells der E-Plate vorab mit einem Tethering-Antikörper aus den Immunotherapy Kitsbeschichtet. Die Tumorzellen binden an die Tethering-Antikörper, sodass ihr Zustand über die Impedanz-Biosensoren empfindlich verfolgt werden kann. Sobald die immobilisierten Zellen Konfluenz erreicht haben, werden Effektorzellen zugegeben und die Abtötung über mehrere Effektor-zu-Zielzell-Verhältnisse (E:T) hinweg gemessen. Das liefert quantitative Einblicke in die immunvermittelte Zytotoxizität in Echtzeit.

Application Note: Evaluating Functional Potency of Immunotherapies Targeting Tumors of B Cell Origin

Abtötungsassay mit Zielzellen in Suspension

Tiefere Einblicke als andere Wirksamkeitsassays

Anders als arbeitsintensive Assays, die mehrere Zeitpunkte und Techniken erfordern, bietet xCELLigence RTCA eine markierungsfreie, automatisierte Lösung mit einem umfassenden Bild der Immunzell-vermittelten Abtötung. Das System erfasst das dynamische Zellverhalten bei niedrigen, physiologisch relevanten E:T-Verhältnissen und erzeugt mit der xCELLigence RTCA Software Pro automatisch detaillierte Datenplots – für eine Analyse, die den In-vivo-Bedingungen näherkommt.

Fallstudie:
Building a CAR-T Toolbox for Cell Therapies

Vergleichstabelle gängiger Wirksamkeitsassays: xCELLigence eSight und RTCA gegen Live-Cell-Imaging, Durchflusszytometrie, Chrom-Freisetzung, LDH-Freisetzung und IFN-gamma-Freisetzung, nach markierungsfrei, Arbeitsschritten, Echtzeitkinetik, Langzeitabtötung, Wirkmechanismus und Empfindlichkeit

Application Notes

Real-Time Potency Assay for CAR T Cell Killing of Adherent Cancer Cells

Bispecific T Cell Engager (BiTE) Mediated Cancer Cell Lysis

Evaluating Functional Potency of Immunotherapies Targeting Tumors of B Cell Origin

Real-time measurement of Natural Killer Cell Activity and Antibody-Dependent Cell-Mediated Cytotoxicity

Label-Free Assay for NK Cell-Mediated Cytolysis

Fallstudie

Fallstudie: Building a CAR-T Toolbox for More Comprehensive Assessment of Cell Therapies

Fallstudie: Immune-cell function - Quantifying Immune-Cell Mediated Killing

Handbuch

xCELLigence RTCA Cancer Immunotherapy

Publikationen

  1. Nagarsheth, N.B.; Norberg, S. M.; Sinkoe, A. L. et al.TCR-Engineered T Cells Targeting E7 for Patients with Metastatic HPV-Associated Epithelial Cancers.Nat. Med.2021,27(3), 419–425. doi:10.1038/s41591-020-01225-1
  2. Rodriguez-Garcia, A.; Lynn, R. C.; Poussin, M. et al.CAR-T Cell-Mediated Depletion of Immunosuppressive Tumor-Associated Macrophages Promotes Endogenous Antitumor Immunity and Augments Adoptive Immunotherapy.Nat Commun.2021,12(1), 877. Published 9 Feb 2021. doi:10.1038/s41467-021-20893-2
  3. Nguyen, P.; Okeke, E.; Clay, M. et al.Route of 41BB/41BBL Costimulation Determines Effector Function of B7-H3-CAR.CD28ζ T Cells.Mol. Ther. Oncolytics.2020,18, 202–214. Published 23 Jun 2020. doi:10.1016/j.omto.2020.06.018
  4. Park, A. K.; Fong, Y.; Kim, S. I. et al.Effective Combination Immunotherapy Using Oncolytic Viruses to Deliver CAR Targets to Solid Tumors.Sci. Transl. Med.2020,12(559), eaaz1863. doi:10.1126/scitranslmed.aaz1863
  5. Gitto, S. B.; Kim, H.; Rafial, S. et al.An Autologous Humanized Patient-Derived-Xenograft Platform to Evaluate Immunotherapy in Ovarian Cancer.Gynecol. Oncol.2020,156(1), 222–232.
  6. Shrestha, B.; Zhang, Y.; Yu, B. et al.Generation of Antitumor T Cells for Adoptive Cell Therapy With Artificial Antigen Presenting Cells.Journal Immunother.2020,43(3), 79–88. doi:10.1097/CJI.0000000000000306
  7. Choi, B.D.; Yu, X.; Castano, A.P. et al.CAR-T cells Secreting BiTEs Circumvent Antigen Escape Without Detectable Toxicity.Nat. Biotechnol.2019,37, 1049–1058.

Protokolle

  1. Dunsford, L. S.; Thoirs, R. H.; Rathbone, E.; Patakas, A.A Human In Vitro T Cell Exhaustion Model for Assessing Immuno-Oncology Therapies. InImmuno-Oncology. Methods in Pharmacology and Toxicology; Tan, S. L., Eds.; Humana, New York, NY, 2020.
  2. Xi, B.; Ye, P.; Golubovskaya, V.; Abassi, Y.In Vitro Functional Assay Using Real-Time Cell Analysis for Assessing Cancer Immunotherapeutic Agents. InImmuno-Oncology. Methods in Pharmacology and Toxicology. Tan, S. L. Eds.; Humana, New York, NY, 2020.
  3. Xi, B.; Berahovich, R.; Zhou, H. et al.A Real-time Potency Assay for Chimeric Antigen Receptor T Cells Targeting Solid and Hematological Cancer Cells.J. Vis. Exp.2019,153, e59033, doi:10.3791/59033.

Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren.