Nachweis kleiner Partikel
Hochempfindliche SSC- und Fluoreszenzdetektion mit dem NovoCyte Advanteon Flow Cytometer
Der Nachweis kleiner biologischer Partikel, etwa von extrazellulären Vesikeln (EV), ist entscheidend für die Krankheitsforschung und die Suche nach Biomarkern. Herkömmliche Durchflusszytometer stoßen dabei wegen ihrer begrenzten Empfindlichkeit oft an Grenzen.
Diese Application Note zeigt, wie das NovoCyte Advanteon flow cytometer, ausgestattet mit modernen Detektoren, hochempfindliche Seitwärtsstreuung (SSC) und Fluoreszenzdetektion für eine überlegene Analyse kleiner Partikel liefert.
Die wichtigsten Ergebnisse
Beads von nur 100 nm ließen sich allein anhand des SSC klar auflösen.
Biologische EV (zum Beispiel Lipopartikel und von Thrombozyten stammende EV) wurden zuverlässig nachgewiesen und quantifiziert; Verdünnungsreihen und Detergenz-Kontrollen bestätigten das Ergebnis.
Von Thrombozyten stammende EV (100–250 nm) wurden nach ADP-Stimulation freigesetzt und sicher nachgewiesen – über die Marker CD9, CD61 und Annexin V. Dass das Signal nach Detergenzbehandlung verschwand, bestätigte die Unversehrtheit der Vesikel.
Absolute Zählung über die Spritzenpumpe erlaubt genaue Messungen ohne externe Beads.
Abbildung 1. Nachweis von Kleinstpartikel-Beads am NovoCyte Advanteon. Drei handelsübliche Kleinpartikel-Beads zeigen, wie empfindlich die Seitwärtsstreuung (SSC) des NovoCyte Advanteon misst: NIST-rückführbare Größenstandards von Bang’s Laboratories (A), ApogeeMix Beads (B) und BioCytex Megamix-Plus (C). Partikel von nur 100 nm ließen sich mühelos vom Hintergrund trennen. Geräteeinstellungen: SSC-H Gain 1.000, FSC-H Gain 1.000, Schwelle SSC-H größer als 1.000.
Fazit
Der NovoCyte Advanteon bietet einen leistungsfähigen Nachweis kleiner Partikel und damit die genaue Analyse von EV und anderen Vesikeln im Nanometerbereich. Mit hoher Empfindlichkeit und stabiler Leistung überwindet er zentrale Grenzen herkömmlicher Zytometer und wird so zu einem wertvollen Werkzeug für die biomedizinische und translationale Forschung.
Bringen Sie Ihre Forschung an kleinen Partikeln mit den Durchflusszytometern von NovoCyte weiter.
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