Assays zur Abtötung durch Immunzellen
Killing-Potenz markierungsfrei über Minuten bis Tage messen, bei niedrigen, physiologisch relevanten Effektor-Ziel-Verhältnissen — einschließlich seriellem Killing und Erschöpfung.
Erfassen Sie die Abtötung durch Immunzellen in Echtzeit
xCELLigence RTCA nutzt eine markierungsfreie, impedanzbasierte Technologie, um die Abtötung durch Immunzellen kontinuierlich und automatisch zu messen – über Minuten bis Tage. So lässt sich der Verlauf in Echtzeit bei niedrigen, physiologisch relevanten Effektor:Zielzell-Verhältnissen (E:T) verfolgen, was hochsensitive, quantitative Wirksamkeitsdaten liefert.
Präzise Messungen in Echtzeit der Wirksamkeit der Abtötung durch Immunzellen.
Detaillierte Einblicke in Abtötungsmechanismen, serielle Abtötung und Erschöpfung (Exhaustion).
Einfache Arbeitsabläufe – Zellen aussäen und die Abtötungskinetik unter physiologischen Bedingungen verfolgen.
FDA 21 CFR Part 11 konform – für die Integrität elektronischer Daten.
Abtötung durch Immunzellen – Arbeitsablauf des Assays
xCELLigence RTCA misst die Abtötung durch Immunzellen mit impedanzbasierter Technologie kontinuierlich und automatisch über Minuten bis Tage – ohne zusätzliche Markierung. Dieser anwenderfreundliche Arbeitsablauf mit hohem Durchsatz ermöglicht eine präzise Verfolgung bei niedrigen, physiologisch relevanten Effektor:Zielzell-Verhältnissen (E:T) und liefert sensitive, quantitative Wirksamkeitsdaten.
Einfach in der Anwendung: Geben Sie Ziel- und Effektorzellen in die patentierten E-Plates, setzen Sie die E-Plate in das xCELLigence-Gerät ein und starten Sie die Messung:
Schritt 1: Adhärente Zielzellen (z. B. Tumorzellen) werden in die Wells der E-Plate ausgesät. Der Cell Index steigt, während die Zielzellen anhaften und proliferieren.
Schritt 2: Nicht-adhärente Effektorzellen (z. B. CAR-T-Zellen) werden in die Wells gegeben. Diese Zellen führen zu keinem Anstieg des Cell Index, da sie nicht an den Goldelektroden anhaften.
Schritt 3: Die zytolytische Aktivität der Effektorzellen wird empfindlich und präzise erfasst und zeigt sich als Abfall des Cell Index.
Mehrere Perspektiven auf die Abtötungsaktivität von Immunzellen
Forschende optimieren chimäre Antigenrezeptor-T-Zellen kontinuierlich, um Spezifität, Wirksamkeit und Persistenz zu maximieren. Das xCELLigence RTCA eSight kombiniert impedanzbasierte Technologie mit Live-Cell-Imaging und liefert so hochsensitive, multiplexe und quantitative Messungen der Abtötung durch Immunzellen aus mehreren Perspektiven – ohne zusätzlichen Arbeitsaufwand. Sie erhalten konsistentere Ergebnisse und sparen Zeit, indem Sie die Abtötung durch Immunzellen in einem einzigen Arbeitsablauf messen.
Impedanzbasierte Daten mit Live-Cell-Imaging multiplexen – für höhere Ergebnissicherheit
Während die Standardsysteme xCELLigence RTCA (Modelle SP, MP und HT) umfassende, nicht-invasive und markierungsfreie Messungen im 96- oder 384-Well-Format bieten, kombiniert das xCELLigence RTCA eSight diese Technologie zusätzlich mit Live-Cell-Imaging und stärkt damit die Verlässlichkeit Ihrer Zellanalysen und Ergebnisse weiter. Mit diesem integrierten Gerät erfassen Sie fünf komplementäre Datenströme – Impedanz, Hellfeld sowie rote, grüne und blaue Fluoreszenzbildgebung – an ein und derselben Zellpopulation und gewinnen so tiefere Einblicke in die Immunzell-vermittelte Abtötung.
Application Note: Real-Time Potency Assay for CAR T Cell Killing of Adherent Cancer Cells
Assays zur Abtötung durch Immunzellen bei hämatologischen Tumoren
Der Assay zur Immunzell-vermittelten Abtötung mit xCELLigence RTCA lässt sich auch auf Zellen hämatologischer Tumoren übertragen: Dazu beschichten Sie die Wells der E-Plate vorab mit einem Tethering-Antikörper aus den Immunotherapy Kits. Die Tumorzellen binden an die Tethering-Antikörper, sodass ihr Zustand über die Impedanz-Biosensoren empfindlich verfolgt werden kann. Sobald die immobilisierten Zellen Konfluenz erreicht haben, werden Effektorzellen zugegeben und die Abtötung über mehrere Effektor-zu-Zielzell-Verhältnisse (E:T) hinweg gemessen. Das liefert quantitative Einblicke in die immunvermittelte Zytotoxizität in Echtzeit.
Application Note: Evaluating Functional Potency of Immunotherapies Targeting Tumors of B Cell Origin
Tiefere Einblicke als andere Wirksamkeitsassays
Anders als arbeitsintensive Assays, die mehrere Zeitpunkte und Techniken erfordern, bietet xCELLigence RTCA eine markierungsfreie, automatisierte Lösung mit einem umfassenden Bild der Immunzell-vermittelten Abtötung. Das System erfasst das dynamische Zellverhalten bei niedrigen, physiologisch relevanten E:T-Verhältnissen und erzeugt mit der xCELLigence RTCA Software Pro automatisch detaillierte Datenplots – für eine Analyse, die den In-vivo-Bedingungen näherkommt.
Häufig eingesetzte Potenz-Assays
| xCELLigence eSight (Impedanz-Biosensor und Live-Cell-Imaging) | xCELLigence S16/DP/SP/MP (Impedanz-Biosensor) | Live-Cell-Imaging | Durchflusszytometrie | Chromium-Release | LDH-Release | IFNγ Release-Assay | |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Markierungsfrei | ✓ | ✓ | |||||
| Wenige Arbeitsschritte | ✓ | ✓ | |||||
| Automatische, objektive Datenauswertung | ✓ | ✓ | |||||
| Kinetische Daten in Echtzeit | ✓ inkl. schneller Kinetik (Sekunden) | ✓ inkl. schneller Kinetik (Sekunden) | ✓ | ||||
| Langzeit-Killing (>24 h) | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | |||
| Direkte Potenzbestimmung | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | |||
| Bestimmung des Wirkmechanismus | ✓ | ✓ | ✓ | ||||
| Validierung | ✓ | ||||||
| Homogener Assay | ✓ | ✓ | ✓ | ||||
| Hohe Sensitivität | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | |
| Nicht radioaktiv | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ |
Weiterführende Literatur
Application Notes
Real-Time Potency Assay for CAR T Cell Killing of Adherent Cancer Cells
Bispecific T Cell Engager (BiTE) Mediated Cancer Cell Lysis
Evaluating Functional Potency of Immunotherapies Targeting Tumors of B Cell Origin
Real-Time, Label-Free Measurement of Natural Killer Cell Activity and Antibody-Dependent Cell-Mediated Cytotoxicity
Label-Free Assay for NK Cell-Mediated Cytolysis
Fallstudie
Fallstudie: Building a CAR-T Toolbox for More Comprehensive Assessment of Cell Therapies
Fallstudie: Immune-cell function - Quantifying Immune-Cell Mediated Killing
Handbuch
xCELLigence RTCA Cancer Immunotherapy
Publikationen
- Nagarsheth, N.B.; Norberg, S. M.; Sinkoe, A. L. et al. TCR-Engineered T Cells Targeting E7 for Patients with Metastatic HPV-Associated Epithelial Cancers. Nat. Med. 2021, 27(3), 419–425. doi:10.1038/s41591-020-01225-1
- Rodriguez-Garcia, A.; Lynn, R. C.; Poussin, M. et al. CAR-T Cell-Mediated Depletion of Immunosuppressive Tumor-Associated Macrophages Promotes Endogenous Antitumor Immunity and Augments Adoptive Immunotherapy. Nat Commun. 2021, 12(1), 877. Published 9 Feb 2021. doi:10.1038/s41467-021-20893-2
- Nguyen, P.; Okeke, E.; Clay, M. et al. Route of 41BB/41BBL Costimulation Determines Effector Function of B7-H3-CAR.CD28ζ T Cells. Mol. Ther. Oncolytics. 2020, 18, 202–214. Published 23 Jun 2020. doi:10.1016/j.omto.2020.06.018
- Park, A. K.; Fong, Y.; Kim, S. I. et al. Effective Combination Immunotherapy Using Oncolytic Viruses to Deliver CAR Targets to Solid Tumors. Sci. Transl. Med. 2020, 12(559), eaaz1863. doi:10.1126/scitranslmed.aaz1863
- Gitto, S. B.; Kim, H.; Rafial, S. et al. An Autologous Humanized Patient-Derived-Xenograft Platform to Evaluate Immunotherapy in Ovarian Cancer. Gynecol. Oncol. 2020, 156(1), 222–232.
- Shrestha, B.; Zhang, Y.; Yu, B. et al. Generation of Antitumor T Cells for Adoptive Cell Therapy With Artificial Antigen Presenting Cells. Journal Immunother. 2020, 43(3), 79–88. doi:10.1097/CJI.0000000000000306
- Choi, B.D.; Yu, X.; Castano, A.P. et al. CAR-T cells Secreting BiTEs Circumvent Antigen Escape Without Detectable Toxicity. Nat. Biotechnol. 2019, 37, 1049–1058.
Protokolle
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- Xi, B.; Ye, P.; Golubovskaya, V.; Abassi, Y. In Vitro Functional Assay Using Real-Time Cell Analysis for Assessing Cancer Immunotherapeutic Agents. In Immuno-Oncology. Methods in Pharmacology and Toxicology. Tan, S. L. Eds.; Humana, New York, NY, 2020.
- Xi, B.; Berahovich, R.; Zhou, H. et al. A Real-time Potency Assay for Chimeric Antigen Receptor T Cells Targeting Solid and Hematological Cancer Cells. J. Vis. Exp. 2019, 153, e59033, doi:10.3791/59033.
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren.