Phagozytose-Assays
Phagozytische Aktivität live und markierungsfrei verfolgen, statt zu fixieren, zu quenchen und zu waschen — kinetische Messwerte über Stunden bis Tage, auch zum Abtöten von Mikroorganismen.
Phagozytose-Assays in Echtzeit – einfach gemacht
Bei der Phagozytose nehmen Zellen große Partikel auf – apoptotische Zellen, Erreger oder Zelltrümmer. Sie ist für die Immunabwehr und das Gleichgewicht im Gewebe unentbehrlich. Viele Zelltypen können phagozytieren; die eigentlichen Fresszellen sind aber die Makrophagen, die täglich Milliarden sterbender Zellen beseitigen.
Herkömmliche Phagozytose-Assays sind arbeitsaufwendig und liefern nur begrenzte Endpunktwerte. Die Echtzeit-Zellanalyse (RTCA) von xCELLigence ist der schnellere und aussagekräftigere Weg.
Ein klügerer Weg, Phagozytose zu messen
Die xCELLigence-Technologien bieten einen markierungsfreien, sehr empfindlichen Phagozytose-Assay in Echtzeit. Er liefert:
Mühelosen Nachweis an lebenden Zellen der Phagozytose-Aktivität über die eingebaute Bildgebung.
Quantitative, reproduzierbare Daten mit wenigen Handgriffen – ohne Fixieren, Löschen oder Waschen.
Empfindliche kinetische Messwerte bei hohem Durchsatz, über Stunden bis Tage.
Genaue Einblicke in Substanzen und Bedingungen, die die Phagozytose fördern oder hemmen.
Das Abtöten von Mikroorganismen durch Phagozytose in Echtzeit messen
Herkömmliche Phagozytose-Assays sind arbeitsaufwendig und liefern nur Momentaufnahmen am Endpunkt. Mit dem xCELLigence RTCA eSight lässt sich durchgehend verfolgen, wie wirksam Immunzellen Mikroorganismen aufnehmen und beseitigen – ohne aufwendigen Ablauf.
Dieser einfache Mix-and-read-Assay liefert kinetische Daten in Echtzeit und hochwertige Bilder für gramnegative wie grampositive Bakterien. Sobald die Bakterien aufgenommen sind und ins saure Phagosom gelangen, nimmt ihre Fluoreszenz zu – das erlaubt einen schnellen, automatisierten und sehr empfindlichen Nachweis der Phagozytose-Aktivität.
RAW-264.7-Makrophagen (GFP-exprimierend) beim Phagozytieren von pHrodo Red E.coli BioParticles
Phagozytose messen mit pHrodo Red E. coli BioParticles.
(A) Die Fluoreszenz von pHrodo Red steigt stark an, wenn der pH von 7,4 auf 4,0 fällt. (B) Ausserhalb der Zelle fluoreszieren die BioParticles nicht; erst im sauren Phagolysosom leuchten sie kräftig rot.
Phagozytose mit pH-empfindlichen Fluoreszenzreagenzien verfolgen
Verfolgen Sie die Phagozytose-Aktivität in Echtzeit mit pH-empfindlichen fluoreszierenden BioParticles. In diesem Beispiel werden Makrophagen kokultiviert mit E. coli , markiert mit einem pH-empfindlichen roten Farbstoff. Bei neutralem pH fluoreszieren diese BioParticles nicht; erst im sauren Phagosom leuchten sie kräftig rot.
Mit steigender Fluoreszenz liefert der Assay klare, eingriffsfreie und quantitative Messwerte der Phagozytose-Kinetik – ideal, um Rezeptor-Liganden-Wechselwirkungen zu untersuchen und Modulatoren von Signalwegen zu bewerten.
Phagozytose-Kinetik in Echtzeit sehen und messen
Verfolgen Sie die Phagozytose, während sie geschieht – mit dem xCELLigence RTCA eSight. RAW-264.7-Makrophagen werden mit pHrodo Red E. coli BioParticles zusammengebracht; Lebendzell-Bildgebung und kinetische Auswertung laufen dabei gleichzeitig. Aus der roten Signalfläche und ihrer Intensität über die Zeit ergibt sich ein klares, quantitatives Bild von Geschwindigkeit und Verlauf der Phagozytose.
Application Note: Visualization and Quantitative Analysis of Macrophage Phagocytosis
Kinetik der Phagozytose, dargestellt mit pHrodo Red E. coli BioParticles.(A) Zeitrafferaufnahmen zeigen die zunehmende rote Fluoreszenz, während RAW-264.7-Makrophagen BioParticles aufnehmen. (B) Die Auswertung über die rote Gesamtfläche bestätigt den fortschreitenden Verlauf; in Wells ohne Makrophagen entsteht kein Signal. (C) Die Kinetik lässt sich über die rote Fläche oder die rote Intensität messen.
Dosisabhängige Hemmung der Phagozytose durch Cytochalasin D.
(A) Nach zwei Stunden gemeinsamer Inkubation nehmen RAW-264.7-Makrophagen (10.000 je Well) mit steigender Cytochalasin-D-Konzentration immer weniger pHrodo Red E. coli BioParticles (6,25 µg) auf. Maßstabsbalken: 120 µm. (B) Die rote Gesamtfluoreszenzfläche in Echtzeit zeigt die dosisabhängige Hemmung. (C) Dosis-Wirkungs-Kurve aus den Flächen unter den Kurven aus (B); daraus ergibt sich ein IC₅₀ von 11 µg/mL (n=3).
Dosisabhängige Hemmung der Phagozytose bewerten
Mit dem xCELLigence RTCA eSight lassen sich RAW-264.7-Makrophagen daraufhin prüfen, welche Substanzen die Phagozytose beeinflussen. Im Beispiel senkt Cytochalasin D die Aktivität deutlich dosisabhängig. Aus den Flächen unter den Echtzeitkurven ergibt sich ein IC₅₀ von 11 µg/mL – ein Beleg dafür, wie schnell und quantitativ sich Hemmstoffe der Phagozytose mit dem eSight beurteilen lassen.