Eosinophile nachweisen und quantifizieren mit dem NovoCyte
Einführung
Eosinophile spielen eine zentrale Rolle in der Immunabwehr und bei allergischen Reaktionen. Die herkömmliche Bestimmung über Morphologie und Handzählung ist jedoch subjektiv und wenig verlässlich.
In dieser Untersuchung hat Dr. Paul Hutchinson (National University of Singapore) gemeinsam mit Agilent (früher ACEA Biosciences) einen durchflusszytometrischen Assay am NovoCyte Flow Cytometer entwickelt. So gelingt der schnelle, genaue und unvoreingenommene Nachweis und die Quantifizierung von Eosinophilen neben anderen Leukozyten-Subpopulationen.
Die wichtigsten Ergebnisse
Großer dynamischer Bereich (7,2 Dekaden): Eosinophile, Lymphozyten, Monozyten und Granulozyten lassen sich in ein und demselben Diagramm klar trennen – besser als bei Wettbewerbssystemen.
Genaue Absolutzahlen: Möglich über die Spritzenpumpe des NovoCyte – ganz ohne Zählbeads.
Verlässliche Identifikationsmarker: Eosinophile lassen sich am FSC/SSC-Profil, an ihrer eigenen Autofluoreszenz und an der CCR3-Expression erkennen.
Abbildung 1: Identifizierung von Eosinophilen über Autofluoreszenz und CCR3. Humanes Blut wurde mit CD4-, CD8- und CCR3-Antikörpern gefärbt und am Agilent NovoCyte Flow Cytometer gemessen. Ausgewertet wurde mit der Software NovoExpress. Mit der Backgating-Technik wurden die im FITC/PE-Diagramm nachgewiesenen autofluoreszenten Zellen (A) auf den Bereich zurückgetragen, in dem die Eosinophilen im FSC/SSC-Punktdiagramm zu erwarten sind (B). Die Eosinophilen wurden nicht nur über ihre starke eigene Autofluoreszenz in den Kanälen FITC und PE bestätigt (C), sondern auch über ihre CCR3-positive Färbung (D). Die CD4+- und CD8+-Lymphozyten sind beide CCR3-negativ; alle Zellen sind auf ein FSC/SSC-Diagramm zurückgetragen dargestellt (E).
Fazit
Das NovoCyte Flow Cytometer bietet eine robuste, hoch auflösende Lösung für den Nachweis von Eosinophilen in humanem Blut – genauer und schneller als herkömmliche Färbe- und Handzählverfahren.
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