mRNA-Nachweis
Aktive HPV-Infektion: E6/E7-mRNA im Durchflusszytometer nachweisen
Einführung
Ein DNA-Test zeigt, dass HPV vorhanden ist. Er zeigt nicht, ob die Infektion etwas tut: Die meisten Infektionen sind vorübergehend und heilen von selbst aus, entscheidend sind die, in denen die viralen Onkogene E6 und E7 tatsächlich abgelesen werden. Ihre mRNA sagt deshalb unmittelbarer etwas über die Virusaktivität aus als virale DNA.
Diese mRNA Zelle für Zelle zu lesen ist der schwierigere Teil. Der FLOWSCRIPT-Assay von Enzo Life Sciences arbeitet mit Oligonukleotid-Sonden, die einen Fluoreszenzfarbstoff und einen Quencher tragen: Ein Signal entsteht erst, wenn eine Sonde in der intakten Zelle an ihr Ziel hybridisiert hat. Übrig bleibt eine Fluoreszenzmessung, die jedes Durchflusszytometer leisten kann — mit der Einzelzell-Auflösung, die eine PCR über das ganze Zellgemisch aufgibt.
Die Messungen unten entstanden auf dem Agilent NovoCyte, der Gerätefamilie, die wir liefern und betreuen. Fragen Sie uns nach einer Vorführung, wenn Sie den Assay an Ihren eigenen Proben sehen möchten. Die Application Note ist als „For Research Use Only“ gekennzeichnet und nicht für diagnostische Verfahren bestimmt.
Der Nachweis von HPV-E6/E7-mRNA zeigt die Virusaktivität unmittelbar an und ist damit klinisch aussagekräftiger als ein DNA-Test allein. Mit dem FLOWSCRIPT HPV E6/E7 Assay und dem Agilent NovoCyte flow cytometer haben Forschende diese Onkogen-Transkripte sowohl in Kontrollzelllinien als auch in zytologischen Proben der Zervix zuverlässig nachgewiesen.
Die wichtigsten Ergebnisse
Hohe Genauigkeit in Zelllinien: HPV-positive HeLa-Zellen waren zu >95 % positiv, HPV-negative Jurkat-Zellen blieben unter 1 %.
Verlässlicher Nachweis in klinischen Proben:Alle HPV-positiven Zervixproben lagen über der Schwelle von 2 % positiver Zellen, alle HPV-negativen darunter.
Schlanker Ablauf: Der große Messbereich macht das Nachstellen der Photomultiplier überflüssig, und wer möchte, automatisiert mit dem NovoSampler Pro und spart Handarbeit.
Abbildung 2. Nachweis der E6/E7-mRNA-Expression in bekannt negativen und positiven ektozervikalen Zellen. Zytologische Proben wurden auf E6/E7-mRNA untersucht. Gezeigt sind je eine beispielhafte positive und negative Probe. Die Schwelle liegt bei 2 % der Zellen im E6/E7-Gate. Alle HPV-negativen Proben lagen unter 2 %, alle HPV-positiven darüber.
Fazit
Das NovoCyte Durchflusszytometer weist HPV-E6/E7-mRNA schnell, verlässlich und einfach auf Einzelzellebene nach – das macht die HPV-Forschung genauer und zügiger.
Bringen Sie Ihren HPV-mRNA-Nachweis mit NovoCyte weiter.
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