Leukozyten-Subpopulationen nachweisen
18-Farben-Immunphänotypisierung von PBMC: zehn Zelltypen in einem Lauf
Einführung
Ein 18-Farben-Panel ist nicht einfach ein längeres Vier-Farben-Panel. Spektrale Überlappung, Antikörpertitration und die Gating-Strategie müssen zusammen gelöst werden, und ein Panel, das auf einem Gerät läuft, läuft nicht von selbst auch auf dem nächsten.
Von einem veröffentlichten Panel auszugehen nimmt den größten Teil dieser Vorarbeit ab. Dieses baut auf OMIP-024 auf (Moncunill et al., Cytometry Part A 2014, 85(12), 995–998), einem optimierten Panel, das aus einer kleinen Blutmenge möglichst viel über den Immunstatus herausholen sollte — ursprünglich für PBMC von Kindern in der Impfstoff-Forschung. Es erfasst zehn Zelltypen und erkennt regulatorische T-Zellen an CD25 und CD127, sodass keine intrazelluläre Foxp3-Färbung nötig ist.
Was bleibt, ist der Teil, der zu Ihrem eigenen Labor gehört: das Panel auf die Detektorbestückung Ihres Geräts abzustimmen und die Antikörper an Ihrem eigenen Material neu zu titrieren. Die Application Note zeigt diesen Schritt am Agilent NovoCyte Quanteon, dem Gerät, das wir liefern und betreuen — fragen Sie uns nach einer Vorführung, wenn Sie das Panel an Ihren Proben sehen möchten. Sie ist als „For Research Use Only“ gekennzeichnet und nicht für diagnostische Verfahren bestimmt.
Wer den Immunstatus verstehen will, muss viele Leukozyten-Subpopulationen genau verfolgen. Mit dem Agilent NovoCyte Quanteon Flow Cytometer haben Forschende ein 18-Farben-Panel zur Immunphänotypisierung entwickelt, das ein breites Feld von Zelltypen in humanen PBMC gleichzeitig erkennt und quantifiziert – darunter Monozyten, B-Zellen, NK-Zellen und mehrere T-Zell-Untergruppen.
Die wichtigsten Ergebnisse
Dieses auf OMIP-024 aufbauende Panel erlaubt:
Ein umfassendes Immunprofil aus kleinen Probenmengen.
Eine genaue Antikörpertitration mit der Software NovoExpress – für beste Auflösung bei geringstem Hintergrund.
Eine eingehende Betrachtung von Aktivierung und Differenzierung der NK- und T-Zellen, die für die Beurteilung von Immunantworten auf Impfungen und Infektionen entscheidend ist.
Fazit
Der NovoCyte Quanteon macht Durchflusszytometrie mit vielen Parametern möglich – leistungsfähig, breit angelegt und im Einzelnen genau. Das ist die Grundlage einer belastbaren Immunüberwachung.
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