Zytotoxizität in Echtzeit messen
Klassische Zytotoxizitäts-Assays liefern einen einzigen Endpunkt. xCELLigence RTCA verfolgt Zellgesundheit, Proliferation und Morphologie in Echtzeit — von ADCC über 3D-Tumormodelle bis zur Wasserüberwachung.
Zytotoxizitätsassays
Herkömmliche Assays zur Bewertung der Zytotoxizität prüfen typischerweise die Membranintegrität, indem sie den Übertritt von Markern in die Zelle oder das Austreten von Biomolekülen aus der Zelle betrachten. Diese Assays sind jedoch zeitaufwendig und liefern nur Endpunktdaten. Der xCELLigence RTCA Zytotoxizitäts-Assay liefert dagegen quantitative Daten in Echtzeit und damit einen detaillierteren Einblick in die zellulären Mechanismen, die Zytotoxizität verursachen. Die Anwendungen zur Messung der Zytotoxizität reichen von der Untersuchung der Tumorzytotoxizität in 3D-Zellkulturen über die antikörperabhängige zelluläre Zytotoxizität (ADCC) und die Überwachung von Umweltwasserproben bis hin zum Hochdurchsatz-Screening und -Profiling von Wirkstoffen.
Über die Grenzen traditioneller Zytotoxizitätsassays hinaus
Verfolgen Sie in Echtzeit, wie Wirkstoffe oder Substanzen Zellgesundheit, Proliferation und Morphologie beeinflussen.
Erstellen Sie Dosis-Wirkungs-Kurven und beobachten Sie zelluläre Langzeitreaktionen mit minimalem Aufwand.
Verfolgen Sie Wachstum und Schrumpfung von 2D- oder 3D-Tumorzellen mittels Live-Cell-Imaging.
Eine einfache Hochdurchsatz-Methode.
Zytotoxizitäts-Screening und -Profiling
Führen Sie Hochdurchsatz-Screening und -Profiling von Substanzen einfach mit dem xCELLigence RTCA HT Instrument durch, das Veränderungen der Zelladhäsion, der Morphologie und der Wachstumseigenschaften als Reaktion auf zytotoxische Substanzen in Echtzeit überwacht. Treffen Sie fundierte Entscheidungen über den Zeitpunkt der Zellbehandlung und erstellen Sie Dosis-Wirkungs-Kurven zu mehreren Zeitpunkten, ohne den Arbeitsaufwand zu erhöhen.
Zytotoxizitäts-Profiling von A549-Lungenkarzinomzellen in Echtzeit mit dem xCELLigence RTCA HT System. Normalisierte Cell-Index-Verläufe und 72-Stunden-Dosis-Wirkungs-Kurven (xCELLigence vs. WST-1) veranschaulichen die Substanzwirkungen und die zugehörigen EC50-Werte.
Dynamische Beobachtung zytotoxischer Substanzen
In einer impedanzbasierten Echtzeitanalyse wurden A549-Zellen zytotoxischen Substanzen mit unterschiedlichen Wirkmechanismen ausgesetzt – darunter 5-Fluorouracil, Vinblastin und Staurosporin. Jede Substanz erzeugte eine charakteristische kinetische Signatur, die ihren Wirkmechanismus, die Wirkstoffkonzentration, die Expositionsdauer und die zelluläre Reaktion widerspiegelte.
Da diese Signaturen sehr charakteristisch sind, lassen sich damit Substanzen mit unbekannten Zielstrukturen klassifizieren, indem ihre kinetischen Profile mit denen bekannter Wirkstoffe verglichen werden.
Application Note: Dynamic Monitoring of Cell Proliferation and Viability
Dynamische Beobachtung zytotoxischer Substanzen. A549-Zellen wurden in 96X E-Plates ausgesät und kontinuierlich mittels Impedanztechnologie überwacht. Die Zellen wurden mit den angegebenen Endkonzentrationen von (A) Staurosporin, (B) Vinblastin und (C) 5-Fluorouracil behandelt.
Überwachen Sie die Zytotoxizität von 3D-Tumorsphäroiden mit xCELLigence RTCA eSight
Beobachten und quantifizieren Sie das Wachstum einzelner 3D-Tumorsphäroide – markiert oder markierungsfrei – mit dem Agilent xCELLigence RTCA eSight, und das vollständig im Inkubator. Erfassen Sie Wachstum und Schrumpfung von 3D-Tumorzellen einfach und zuverlässig per Live-Cell-Imaging mit Mix-and-Read-Reagenzien und beurteilen Sie Proliferation und Zytotoxizität der Sphäroide umfassend. Die unkomplizierten Readouts zu Viabilität oder Toxizität in 3D liefern reproduzierbare Daten und damit tiefere, aussagekräftigere biologische Erkenntnisse aus Ihren Assays in der Wirkstoffforschung.
Untersuchen Sie 3D-Sphäroid-Zytotoxizität
Das Wachstum von Tumorsphäroiden wird traditionell visuell im Standardmikroskop beurteilt; das ist jedoch zeit- und arbeitsaufwendig. Das xCELLigence RTCA eSight System bietet eine bildbasierte Hochdurchsatz-Screening-Methode für 3D-Tumorsphäroide und damit ein stärker automatisiertes Vorgehen mit weniger Handarbeit und einer einfachen Quantifizierung von Tumorwachstum oder -schrumpfung. In diesem einfachen Arbeitsablauf geben Sie an Tag 3 lediglich die Zellbehandlungen und/oder Reagenzien (eLenti, eTox, eAnnexin oder eCaspase) für die quantitative Analyse hinzu.
Visualisieren und quantifizieren Sie die Kinetik der Zytotoxizität von 3D-Tumorsphäroiden
In diesem Beispiel verfolgt das RTCA eSight Live-Cell-Imaging-System die durch Camptothecin ausgelöste Schrumpfung von HT-1080-Red-Sphäroiden. Die Bilder zeigen HT-1080-Red-Sphäroide, die für 0, 2, 4, 6, 8 und 10 Tage mit verschiedenen Camptothecin-Konzentrationen und einer Vehikelkontrolle behandelt wurden. Dargestellt ist außerdem die quantitative Analyse des konzentrationsabhängigen zytotoxischen Effekts von Camptothecin auf HT-1080-Red-Sphäroide. Ebenfalls gezeigt sind ein grün fluoreszierender Marker für tote Zellen (eTox Green) und die zugehörige Segmentierungsmaske (gelb).
Application Note: Monitoring Drug-Mediated 3D Tumor Spheroid Shrinkage
Bewertung Zytotoxizität von Wasserproben mit xCELLigence RTCA
Erfahren Sie, wie Wissenschaftlerinnen und Wissenschaftler des Alberta Centre for Toxicology einen markierungsfreien zellulären Echtzeit-Assay für die Überwachung von Rohwasser entwickelt haben. Für die Bewertung der Wasserzytotoxizität wurden insgesamt 436 Flusswasserproben gesammelt. Der Assay verwendete HepG2-Zellen (humanes Hepatokarzinom); die Zytotoxizitätsantwort wurde bei Verdünnungen von 80 %, 60 %, 40 %, 30 %, 20 % und 10 % der ursprünglichen Wasserproben geprüft. Das Agilent xCELLigence RTCA System überwachte das Wachstum der HepG2-Zellen nach Exposition gegenüber der kombinierten toxischen Wirkung in den Wasserproben.
Literatur
Application Notes
Real-Time and Dynamic Monitoring of Cell Proliferation and Viability for Adherent Cells
Monitoring Drug-Mediated 3D Tumor Spheroid Shrinkage in Real Time
Assessing Water Cytotoxicity with an Impedance-Based, Real-Time, and Label-Free Cellular Assay
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren.